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Der Hauptunterschied zwischen warmer und kalter Trypsinisierung besteht darin, dass die warme Trypsinisierung an der Inkubation von Geweben mit warmem Trypsin bei 36,50 ° C beteiligt ist, während die kalte Trypsinisierung am Einweichen von Geweben in kaltem Trypsin bei 4 ° C beteiligt ist, gefolgt von der Inkubation bei 36,50 ° C. C..
- Was ist Trypsinisierung von Zellen??
- Was ist Disaggregation von Gewebe?
- Kann Trypsin Zellen abtöten?
- Warum verwenden wir EDTA in der Zellkultur??
- Was ist Disaggregation??
- Was ist Primärkultur in der Mikrobiologie?
- Was ist warme Trypsinisierung?
- Wie lange hält Trypsin??
- Was macht Trypsin mit Milch??
- Wie stoppe ich die Trypsinaktivität??
Was ist Trypsinisierung von Zellen??
Trypsinisierung ist der Prozess der Zelldissoziation unter Verwendung von Trypsin, einem proteolytischen Enzym, das Proteine abbaut, um anhaftende Zellen von dem Gefäß zu dissoziieren, in dem sie kultiviert werden. Bei Zugabe zu einer Zellkultur baut Trypsin die Proteine ab, die es den Zellen ermöglichen, an dem Gefäß zu haften.
Was ist Disaggregation von Gewebe?
Die mechanische Dissoziation von Gewebe kann das wiederholte Zerkleinern mit einer Schere oder scharfen Klingen, das Abkratzen der Gewebeoberfläche, das Homogenisieren, das Filtrieren durch ein Nylon- oder Stahlnetz, das Verwirbeln, das wiederholte Absaugen durch Pipetten oder Nadeln mit kleinem Durchmesser, eine abnormale Osmolalitätsbelastung oder eine beliebige Kombination davon umfassen Techniken.
Kann Trypsin Zellen abtöten?
Die Inkubation von Zellen mit einer zu hohen Trypsinkonzentration über einen zu langen Zeitraum schädigt die Zellmembranen und tötet die Zellen ab.
Warum verwenden wir EDTA in der Zellkultur??
EDTA wirkt als Metallchelator, der Trypsinlösungen zugesetzt wird, um die Aktivität zu steigern. EDTA wird hinzugefügt, um das Calcium und Magnesium von der Zelloberfläche zu entfernen, wodurch Trypsin spezifische Peptidbindungen hydrolysieren kann. Der Hauptgrund für die Verwendung von EDTA zusammen mit Trypsin besteht darin, die Zell-Zell-Adhäsion zu entfernen.
Was ist Disaggregation??
transitives Verb. : in Einzelteile zu zerlegen Sandstein disaggregieren demografische Daten disaggregieren. Intransitives Verb. : um die Moleküle eines Gels aufzubrechen oder auseinander zu zerlegen, um ein Sol zu bilden.
Was ist Primärkultur in der Mikrobiologie?
Die Primärkultur bezieht sich auf das Stadium der Kultur, nachdem die Zellen aus dem Gewebe isoliert und unter den geeigneten Bedingungen vermehrt wurden, bis sie das gesamte verfügbare Substrat einnehmen (d. H. Konfluenz erreichen). ... Nach der ersten Subkultur wird die Primärkultur als Zelllinie oder Subklon bekannt.
Was ist warme Trypsinisierung?
Die warme Trypsinisierung ist eine Methode der Trypsinisierung, bei der warmes Trypsin bei 36,50 ° C zur Behandlung von Gewebe verwendet wird, um Adhäsionsproteine abzubauen. Obwohl es eine wirksame Methode zur enzymatischen Disaggregation von Geweben ist, liefert es aufgrund der nachteiligen Wirkung von warmem Trypsin eine geringere Menge lebensfähiger Zellen.
Wie lange hält Trypsin??
Wenn Sie es länger aufbewahren möchten, sollten Sie es gemäß der Beschreibung Ihres Einrichters vorbereiten. Als Beispiel für ein Trypsin aus der Bauchspeicheldrüse von Rindern (Produktnummer T 4665, SIGMA-ALDRICH) sind Lösungen in 1 mM HCl (pH 3) ungefähr 1 Jahr lang stabil, wenn sie aliquotiert und bei -20ºC gelagert werden.
Was macht Trypsin mit Milch??
Trypsin kann verwendet werden, um Kasein in der Muttermilch abzubauen. Wenn einer Lösung von Milchpulver Trypsin zugesetzt wird, führt der Abbau von Kasein dazu, dass die Milch durchscheinend wird. Die Reaktionsgeschwindigkeit kann gemessen werden, indem die Zeit verwendet wird, die die Milch benötigt, um durchscheinend zu werden.
Wie stoppe ich die Trypsinaktivität??
FBS enthält Proteaseinhibitoren, insbesondere α1-Antitrypsin, die die Trypsinaktivität hemmen. Noch vor der Zugabe von Trypsin sollten die Zellen mit PBS gewaschen werden, um restliches FBS zu entfernen, da dies den Trypsinisierungsprozess behindern könnte.
