Unterschied zwischen Klenow- und T4-DNA-Polymerase

1. Was ist Klenow-Polymerase??
2. Warum Klenow-Fragment bei der DNA-Sequenzierung verwenden??
3. Wie funktioniert die T4-DNA-Polymerase??
4. Benötigt DNA-Polymerase 1 einen Primer??
5. Was sind Okazaki-Fragmente??
6. Wie viele Arten von Desoxynukleotidtriphosphaten werden bei der Sanger-Sequenzierung verwendet??
7. Was ist DNA-Polymerase-Funktion??
8. Was ist 5 '- 3 Exonukleaseaktivität?
9. Was macht eine Exonuklease??
10. Was ist die Funktion der Polynukleotidkinase??
11. Was ist Exonukleaseaktivität der DNA-Polymerase??

Was ist Klenow-Polymerase??

DNA Polymerase I, großes (Klenow) Fragment ist ein proteolytisches Produkt der E. coli DNA Polymerase I, das die Polymerisation und 3 '→ 5' Exonukleaseaktivität beibehält, jedoch die 5 '→ 3' Exonukleaseaktivität verloren hat (1). Klenow behält die Polymerisationstreue des Holoenzyms bei, ohne die 5'-Termini abzubauen.

Warum Klenow-Fragment bei der DNA-Sequenzierung verwenden??

Das Klenow-Fragment ist äußerst nützlich für forschungsbasierte Aufgaben wie: Synthese von doppelsträngiger DNA aus einzelsträngigen Matrizen. Füllen Sie zurückgetretene 3'-Enden von DNA-Fragmenten ein, um den 5'-Überhang stumpf zu machen. Vorstehende 3'-Überhänge verdauen.

Wie funktioniert die T4-DNA-Polymerase??

T4-DNA-Polymerase katalysiert den 5'→ 3'-Einbau von Nukleotiden in doppelsträngige DNA unter Verwendung von einzelsträngiger und grundierter DNA als Matrize. Es besitzt eine starke 3 '→ 5'-Exonukleaseaktivität (Korrekturlesen), zeigt jedoch keine 5' → 3'-Exonukleaseaktivität. ... Diese DNA-Produkte werden häufig beim stumpfen Klonen verwendet.

Benötigt DNA-Polymerase 1 einen Primer??

Um diese Reaktion zu initiieren, benötigen DNA-Polymerasen einen Primer mit einer freien 3'-Hydroxylgruppe, die bereits mit der Matrize basengepaart ist. Sie können nicht bei Null anfangen, indem sie einer freien einzelsträngigen DNA-Matrize Nukleotide hinzufügen. Im Gegensatz dazu kann die RNA-Polymerase die RNA-Synthese ohne Primer initiieren (Abschnitt 28.1. 4)..

Was sind Okazaki-Fragmente??

Okazaki-Fragmente sind kurze Sequenzen von DNA-Nukleotiden (ungefähr 150 bis 200 Basenpaare lang in Eukaryoten), die diskontinuierlich synthetisiert und später durch das Enzym DNA-Ligase miteinander verbunden werden, um den nacheilenden Strang während der DNA-Replikation zu erzeugen.

Wie viele Arten von Desoxynukleotidtriphosphaten werden bei der Sanger-Sequenzierung verwendet??

In Gegenwart der vier Desoxynukleotidtriphosphate (dNTPs: A, G, C und T) verlängert die Polymerase den Primer durch Zugabe des komplementären dNTP zum Matrizen-DNA-Strang.

Was ist DNA-Polymerase-Funktion??

DNA-Polymerase ist ein Enzym, das DNA-Moleküle aus Desoxyribonukleotiden synthetisiert, die die Bausteine ​​der DNA bilden. Die Enzyme spielen eine wesentliche Rolle bei der DNA-Replikation und arbeiten normalerweise paarweise, um zwei passende DNA-Stränge aus einem einzelnen DNA-Molekül zu erzeugen.

Was ist 5 '- 3 Exonukleaseaktivität?

Die 5'-3'-Exonukleaseaktivität ist die einzige aktive Komponente des N-terminalen Fragments der DNA-Polymerase I. Die Hauptaufgabe der 5'-3'-Exonukleaseaktivität besteht darin, die RNA-Primer an den 5'-Enden der neu synthetisierten zu entfernen DNA, damit die Polymeraseaktivität die resultierenden Lücken füllen kann.

Was macht eine Exonuklease??

Exonukleasen sind Enzyme, die Nukleotide nacheinander vom Ende (exo) einer Polynukleotidkette abspalten. Es tritt eine Hydrolysereaktion auf, die Phosphodiesterbindungen entweder am 3'- oder am 5'-Ende aufbricht.

Was ist die Funktion der Polynukleotidkinase??

Die T4-Polynukleotidkinase katalysiert den Transfer des γ-Phosphats von ATP zum 5'-Terminus von Polynukleotiden oder zu Mononukleotiden mit einer 5'-Hydroxylgruppe. Das Enzym kann verwendet werden, um RNA, DNA und synthetische Oligonukleotide vor nachfolgenden Manipulationen wie Ligation und Klonierung zu phosphorylieren.

Was ist Exonukleaseaktivität der DNA-Polymerase??

Die DNA-Polymerase I besitzt eine 3´ → 5´-Exonukleaseaktivität oder "Korrekturlesen" -Funktion, die die Fehlerrate während der DNA-Replikation senkt, und enthält auch eine 5´ → 3'-Exonukleaseaktivität, die es dem Enzym ermöglicht, Nukleotide im wachsenden Strang zu ersetzen von DNA durch Nick-Translation.